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微量DNA产物纯化试剂盒说明书

作者:上海研谨生物科技有限公司 2015-05-27T00:00 (访问量:2269)

微量DNA产物纯化试剂盒说明书

 

 

MicroDNA Purification Kit

  目录号:  YJ0520

 保   存:  室温

 

 

 组分说明                                        

           

                                        Cat.No.                  YJ0520

                                        KitSize                     50

                                       BufferPB                   30ml

                                       BufferPS                   15ml

                              BufferPWconcentrate               10ml

                                       BufferEB                   10ml

                                   SpinColumnDS                    50

                               CollectionTube2ml                 50

 产品简介

 

     本试剂盒是专门针对微量PCR产物及一些酶反应液(酶切,连接,探针标记等)而设计的,利用硅基质膜技术,以非常小的终洗脱体积(可少至10µl,从反应液中快速纯化50bp-50kbDNA片段,纯化过程中可去除引物、寡核苷酸、酶等杂质,可获得高纯度,高浓度,完整性好的DNA,回收率高达90%。本试剂盒回收的DNA可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

 

 注意事项

 

 1.   本试剂盒适用于无选择性地回收溶液中所有的DNA片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择我公司的胶回收试剂盒(YJ0524YJ2302YJ0518YJ0526)。

 

 2.   第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 BufferPW 中加入无水乙醇。

 

 3.   使用前请检查 BufferPB 是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在 37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。

 

 4.   回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。

 

 5.   所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心。

 

 自备:无水乙醇,离心管  

 

 

操作步骤

 

1.    估计PCR反应液或酶切反应液的体积,加入5倍体积的Buffer PB,充分混匀(如PCR反应体系为50µl,则加入250µlBufferPB,无需去除石蜡油或矿物油)。

 

      注意:在加入BufferPB后检测溶液的pH值,若pH值大于7.5,可向其中加入10-30 μl 3M醋酸钠(pH5.0),从而将pH值调到5-7

 

2.    柱平衡:向已装入收集管(CollectionTube)中的吸附柱(SpinColumnDS)中加入200 µl Buffer PS12,000rpm~13,400×g)离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

 

3.    将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

 

      注意:吸附柱容积为700µl,若样品体积大于700µl可分批加入。

 

4.    向吸附柱中加入650 µl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

 

      注意:如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验,例如平末端连接实验或直接测序,建议加入BufferPW后静置2-5分钟再离心。

5.    12,000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。

 

      注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。

6.   将吸附柱置于一个新离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加10-30 µl Buffer EB,室温放置2分钟。12,000rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA

 

      注意:1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。 

 

            2)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中,重复步骤6

 

            3)洗脱体积不应小于10μl,体积过少影响回收效率。

 

            4)如果使用TE洗脱,需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。

 

            5)回收大于10kbDNA片段时,BufferEB应在50℃水浴中预热,适当延长吸附和洗脱时间,可增加回收效率。

上海研谨生物公司对外承接RT-PCR技术服务、细胞培养技术服务、原位杂交技术服务、免疫沉淀技术服务、Western Blotting技术服务、动物模型构建服务、SCI论文服务、PCR实验服务,并为广大科研用户提供各种高品质的试剂和服务,如细胞、血清Elisa试剂盒、质粒提试剂盒DNA产物纯化试剂盒、病毒RNA提取试剂盒、PCR等产品,针对以上各项服务,我们均有具有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。 

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